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藍莓黃酮浸提工藝研究

文章來(lái)源:惠合膠體磨研磨設備廠(chǎng) 發(fā)布日期:2015-10-28 09:30:15作者:admin 點(diǎn)擊次數: 次
摘 要：目的是為了充分利用藍莓資源，優(yōu)化藍莓總黃酮的提取條件和探討藍莓總黃酮含量測定技術(shù)，采用優(yōu)化后的乙醇浸提法得到的提取條件為：時(shí)間 120min,溫度 60℃,料液比 1∶10,乙醇濃度 40%，得出藍莓總黃酮的提取率為 0.373mg/g，影響藍莓浸提的主要因素依次為料液比、時(shí)間、溫度。
藍莓為藍色漿果，具有很高的營(yíng)養保健價(jià)值，富含花青素，有防止腦神經(jīng)老化、強心、抗癌、軟化血管、提高免疫力等功能。藍莓在貴州適宜栽植，不少地方將其列為優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)優(yōu)先發(fā)展，其產(chǎn)業(yè)鏈已具相當規模，但藍莓的精深加工產(chǎn)品并不多見(jiàn)。黃酮類(lèi)化合物具有廣譜的藥理作用，其保健功效顯著(zhù)，有降低心肌耗氧量， 增加冠狀動(dòng)脈及腦血管流量、降血糖、抗氧化、消除體內自由基、抗衰老、增強免疫力等功效。而植物中的天然黃酮更以天然、低毒、綠色、可再生等特點(diǎn)備受人們的喜愛(ài)，黃酮常見(jiàn)的提取方法主要有微波法、聲法、酶解法、浸提法以及臨界提取法，而生產(chǎn)中常以浸提法為主輔以其它提取技術(shù)。 研究藍莓的浸提工藝是為了更好優(yōu)化浸提法提取藍莓黃酮的技術(shù)， 充分利用藍莓植物資源，促進(jìn)藍莓黃酮資源的開(kāi)發(fā)，探討藍莓中總黃酮的提取、測定方法。

1 材料與方法
1.1 材料與儀器
藍莓；試劑：鹽酸、無(wú)水乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁（為分析純）；蘆丁標準品。電子分析天平、 紫外可見(jiàn)分光光度計、HH-6 恒溫循環(huán)水鍋、 旋轉蒸發(fā)儀。
1.2 實(shí)驗方法
1.2.1 實(shí)驗步驟
藍莓→預處理→破碎→溶劑浸泡→過(guò)濾→濃縮→定容→測定
試樣制備：將烘干的藍莓粉碎，先后過(guò) 10 目和24 目篩，留 24 號篩上層為試樣。
1.2.2 標準曲線(xiàn)的繪制
稱(chēng)取 0.200g（至 0.0002g）經(jīng) 120℃減壓干燥至恒重的蘆丁標準品， 置于 1000ml 容量瓶中，用60%的乙醇溶液定容，再分別吸取 0.00mL，1.00mL，2.00mL，3.00mL，4.00mL，5.00mL 至 25mL 容量瓶中，依次各加入 8mL 水、50g/L 的亞硝酸鈉溶液 1.0mL混勻放置 10min， 再加入 100g/L 的硝酸鋁 1.0mL，混勻，放置 10min，后依次加入 200g/L 的氫氧化鈉4.0mL，用水定容，靜置 15min。在 510nm 處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，蘆丁質(zhì)量為橫坐標繪制標準曲線(xiàn)，得出回歸方程。
1.2.3 藍莓中黃酮提取的單因素實(shí)驗
1.2.3.1 溫度
分別稱(chēng)取 1.00g 試樣于 100mL 燒瓶中， 向其中加入 60%乙醇 30mL，搖勻，分別在恒溫水浴鍋中以25℃，40℃，60℃，80℃，100℃加熱 180min, 取出冷卻至常溫，過(guò)濾，濃縮定容至 100mL 待測。
1.2.3.2 時(shí)間
分別稱(chēng)取 1.00g 試樣于 100mL 燒瓶中， 向其中加入 60%乙醇 30mL，搖勻，60℃加熱 30min，60min，120min，180min，210min，取出冷卻至常溫，過(guò)濾，濃縮定容至 100mL 待測。
1.2.3.3 乙醇濃度
分別稱(chēng)取 1.00g 試樣于 100mL 燒瓶中， 向其中加入乙醇溶液 30mL （乙醇濃度分別為 20%，40%，60%，80%，95%），搖勻，60℃加熱 180min，取出冷卻至常溫，過(guò)濾，濃縮定容至 100mL 待測。
1.2.3.4 料液比
試樣與乙醇溶液按質(zhì)量體積比 1∶1，1∶2，1∶4，1∶8，1∶10，1∶15，1∶20，1∶30 加入物料, 搖勻，60℃水浴加熱180min，冷卻至常溫，過(guò)濾，濃縮定容至 100mL 待測。
1.2.4 測定
從供試品中取 2.00mL 到 25mL 容量瓶中定容，作為樣品空白， 再從供試品中吸取 2.00mL 到 25mL容量瓶中， 加入 8mL 水、50g/L 的亞硝酸鈉溶液1.0mL 混 勻 放 置 10min， 再 加 入 100g/L 的 硝 酸 鋁1.0mL，混勻，放置 10min，后加入 200g/L 的氫氧化鈉 4.0mL，用水定容，靜置 15min，在 510nm 處測定吸光度。測得的樣品吸光度減去樣品空白吸光度，代入蘆丁標準曲線(xiàn)方程可得出溶液中總黃酮的質(zhì)量。
1.2.5 黃酮提取的正交試驗設計
通過(guò)單因素試驗，對溫度、時(shí)間、料液比、乙醇濃度四個(gè)因素選取三個(gè)水平，設計 L9（34）正交試驗。
1.2.6 黃酮含量計算
樣品中總黃酮（以蘆丁計）的含量 X（%），按下式計算：X=m1×100m×2×1000×100
式中：m1———樣品溶液中總黃酮的質(zhì)量，mg；
m———樣品的質(zhì)量，g。

2 結果與分析
2.1 標準曲線(xiàn)回歸方程 y=0.7249×C-0.0027。其中 r 為 0.9999，截距為 0.0027，斜率為 0.7249。
2.2 單因素實(shí)驗分析
2.2.1 提取溫度的選擇
分別在 25℃，40℃，60℃，80℃，100℃下加熱浸提藍莓試樣，過(guò)濾，定容，提取液在 510nm 下測定吸光度。在其他條件相同時(shí)，隨著(zhù)溫度的提高，總黃酮質(zhì)量增大，溫度到達 60℃時(shí)，質(zhì)量接近值，溫度進(jìn)一步增高，總黃酮質(zhì)量減小。
2.2.2 提取時(shí)間的選擇
取 1g 試樣分別在溶劑中浸提 30min，60min，120min，180min 及 210min， 測 定 提 取 液 在 波 長(cháng) 為510nm 下的吸光度值。隨著(zhù)浸提時(shí)間的延長(cháng)，總黃酮質(zhì)量在不斷升高，直到時(shí)間為 60min時(shí)，總黃酮質(zhì)量接近水平，然后逐漸下降。
2.2.3 提取溶劑酒精濃度的選擇
酒精濃度分別為 20%，40%，60%，80%，95%浸提試樣， 測定提取液在波長(cháng)為 510nm 下的吸光度值。其他條件相同時(shí)，隨著(zhù)酒精濃度的升高，總黃酮質(zhì)量呈上升趨勢，到乙醇濃度為 60%時(shí)，總黃酮質(zhì)量接近值， 而后隨乙醇濃度的上升， 總黃酮質(zhì)量下降。
2.2.4 料液比的選擇
分別采用料液比為 1∶1，1∶2，1∶4，1∶8，1∶10，1∶15，1∶20，1∶30 的條件下來(lái)提取黃酮，測定提取液在波長(cháng)510nm 時(shí)的吸光值， 換算成總黃酮質(zhì)量， 如圖 4 所示。隨著(zhù)料液比的增大，總黃酮提取率逐漸下降，當料液比過(guò) 1∶8，下降明顯。
2.3 藍莓黃酮提取的正交試驗分析
通過(guò)單因素試驗，對時(shí)間、溫度、料液比、乙醇濃度 4 個(gè)因素選取三個(gè)水平，設計 L9（34）正交試驗，進(jìn)行組合優(yōu)選。
時(shí)間 120min，溫度 60℃，料液比 1∶10，乙醇濃度 40%。在正交試驗的四個(gè)因子中，由 R 值的大小分析我們可以看出， 影響提取率的因素依次為：料液比＞時(shí)間＞溫度，結合 K 值，R 值的分析可得出理論優(yōu)提取條件也為：時(shí)間 120min，溫度 60℃，物料比 1∶10，乙醇濃度 40%，在理論優(yōu)條件下藍莓總黃酮的提取率為 0.373mg/g。所以藍莓黃酮的提取條件為時(shí)間 120min，溫度 60℃，料液比 1∶10，乙醇濃度 40%。正交試驗的 Std.Dev 為 0.069，F 值小于 0.001，說(shuō)明實(shí)驗數據的聚合度較好，實(shí)驗平行性好，度高，實(shí)驗過(guò)程中的系統誤差小。

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